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液相色譜的定性定量分析
來源:EWG1990學習網 | 作者:admin | 發布時間: 2023-03-30 | 1803 次瀏覽 | 分享到:

、定性分析

在**液相色譜中,常用的定性分析有下列五種方法。

1、利用已知標準樣定性

由于每一種化合物在特定的色譜條件下有其特定的保留值,如果在相同的色譜條件下,被測物與標樣的保留值相同,則可初步認為被測物與標樣相同。

2、利用紫外和熒光光譜定性

由于不同的化合物有其不同的紫外吸收或熒光光譜,對檢測池中的待檢樣品進行全波長(180~800nm)掃描,得到紫外可見光或熒光光譜圖;再用相應標準品,按同樣方法處理,也得到一個光譜圖,比較這兩張圖譜,即可鑒別該樣品是否與標準品相同。對于某些有特征光譜圖的化合物,也可以與所發的標準圖譜來比較以進行定性。

3、收集柱后流出組分,再用其他化學或物理方法定性

液相色譜常用化學檢測器,被測物經過檢測器后不受破壞,所以可以收集各組分,然后再用紅外光譜、質譜、核磁共振等方法進行鑒定。

4、HPLC 指紋圖譜分析法

HPLC 指紋圖譜分析法是指紋圖譜與 HPLC 相結合的一種分析方法,目前已成為中藥質量控制的方法,適用于中藥復雜成分的分離、分析和指紋圖譜的建立。在食品上主要用于天然成分的分析。被分離、分析物質預處理后用HPLC 測定**譜峰,經過計算機庫存信號的檢索及對質譜圖的解析,對所含成分做出定性鑒定。

5、建立液相色譜定性方法

可根據以下幾點,建立合理的液相色譜分析方法:選擇合適的分析樣品的液相色譜方法;選擇合適的柱子;選擇合適的k(峰容量因子)的條件;確定良好的峰位(α);選擇良好的柱條件(*佳 N 值)。

根據樣品的情況,如分子量是大于2000還是小于2000,樣品是溶于水還是不溶于水,確定選擇何種液相方法。見下圖。

選擇溶劑強度配成適宜的流動相,以得到理想的k,使k盡量在1~10的范圍內(特殊情況也允許0.5<k<20)。溶劑的黏度也很重要,一般黏度要小于2×10-3Pa·s。

二、定量分析

在**液相色譜分析中常用的定量分析方法有外標法和內標法。

1、外標法

外標法是以被測化合物的純品或已知其含量的標樣作為標準品,配成一定濃度的標準系列溶液,注入色譜儀,得到的響應值(峰高或峰面積)與進樣量在一定范圍內成正比。用標樣濃度對響應值繪制標準曲線或計算回歸方程,然后用被測物的響應值求出被測物的量。

2、內標法

內標法是在樣品中加入一定量的某一物質作為內標進行的色譜分析,被測物的響應值與內標物的響應值之比是恒定的,此比值不隨進樣體積或操作期間所配制的溶液濃度的變化而變化,因此可得到較準確的分析結果。

具體操作步驟如下。

(1)先準確稱取被測組分 a 的標樣 Wa內標物,加入一定量溶劑混合,即得混合標樣。取任意體積(μL)注入色譜儀,得色譜峰面積Aa(被測組分a標樣峰面積)及峰面積As(內標物峰面積),用下式計算相對響應因子Sa。

(2)稱取被測物W,然后加入準確稱重的內標物W's,加入一定體積的溶劑混合。取任意體積(μL)注入色譜儀,測得被測組分a的峰面積A'a,內標物峰面積為A's。按下式計算被測物中 a 組分的質量W'a。

a 組分在被測物中的含量為:

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